Химия протеолиза - Антонов В.К.
Скачать (прямая ссылка):
РИС.75. Кинетика связывания профлавина химитрипсином при различных pH, иллюстрирующая наличие неактивной формы фермента [2306]
а - а-химотрипсин (на вставке: к фелменту при pH 6,84 добавляли раствор профлавина с pH 9,5); б - 7-химотрипсин. Фермент инкубировал! в буфере с pH , смешивали с профлавином в концентрированном фосфатном буфере с pH и
О КОН
измеряли разностное поглощение I , _5)
Пунктирная линия соответствует быстрой ассоциации профлавина с активной формой фермента. Кинетические кривые иллюстрируют скорость превращения неактивной формы в активную
Скорость перехода из активной конфс рмацич в неактивную относительно невелика (й-0,6 с-1 при pH 6,3 и 25° С [2306]) и поэтому может влиять на наблюдаемые кинетические параметры гидролиза субстрата.
Другие примеры конформационых изменений, происходящих при изменении pH, можно найти в работах по Оромелаину [2309], клострипаих» [743], карбокси-пептидазе Y [2310] и т.д.
Таким образом, определяемые из данных по ph-зависимос ги значения рКа групп фермента во многих случаях являются кажущимися значениями, приписать которые "ем или ]ным функциональным группам довольно сложно. Это усугубляется еще и тем. что значениия рйа групп в белке могут сильно отличаться от их значений в модельных соединениях.
5.2.3. Эксьерименталлнь'э д; иные
Из яанн“2г, приведет ых в табл.54, видно, что связывание субстратов, как правило, мало изменяет рйа каталитически активных групп амидгидролаз. Для свободных ферментов значения рКа мало зависят от лша субстрата, хотя встречаются исключения, которые трудно >бъяснить различиями в условиях определения. Осэбенно большие различия наблюдаются у пепсина. Так, значение рК для свободного фермента в случае субстратов, содержащих остаток His, совершенно иное, неги с нейтральными субстратами. То же самое наблюдается для пептида GlyGlyPhePheOEi, BzLysPbePheOEt и др. [1878,2333], а также для
Таблица 54. Значение рК групп активных центров некоторых амидгидролаз а
Фермент Субстрат* рй0 свобод йа фермент- Литера-
ного субстратного 1урный
фермента комплекса источник
а- Химотрип AcTrpOEt 6,77 6,86 [2311 ]
син AcPheAlaMH2 6,8 6,6 [2298]
HTrpOEt - 5,45;7,5:7,25 [2312]
Р-Трипсин ZLysONp 4,5;7,1 4,6;7,1 [2313,
HlysOMe 5,42,6.57,7.25 2314]
[2315]
Р-Калликреин BzAlaOMe 7,08 6.7 [2316]
панкреати ZLysONp 4,4:6,9 4,4;6,9 [2314]
ческий
Эластаза AoAla3pHA 7,16 6,91 [2317]
лейкоцитар
ная
Карбоксипеп- ZPheLeu 4,4; 6, .5' 5,4;7,7 [2318]
тидаза Y AcPheOEt 5,9:8,9 5,2;9,1 [2318]
Папаин ZLysONp(pH<6) 3,35;4,0 4,3;8,2 [2319]
ZAlaOP 3,56;8,07 [2320]
BzArgpNA [2321 ]
Клострипаин BzArgOEt 6,4;8,35 8,25 [2322]
Пепсин ZPhe(N02)PheApm 2,9;4,2 4,3 [2323]
AoPheTyrNH2 1i,17;4,35 1,35:4,15 [2324]
AcPheTyrOH 1 ,17 1,12;3,7 [2324]
ZHisPhePheOEt 3,7;>5 3,5; 5,2 [2325]
Химозин ZHiePheTrpOEt 2,9;5,4 - [2326]
Карбоксиеп- ZGlyGlyLeu 6,Т9Т9,11 6,28;9,3 [2327]
тидаза А NBzPlaOH 9,4 . [2328]
Термолизин PALeuNH2 6,2;7,8 - [2329]
Лейцинамино- HLeupNA (Mg+) 8,8 [2330]
пептидаза
(хрусталик)
Аминопепти- HLeupNA 4,9:7,55; 5,3 [2331 ]
даза 10.0Ы0 .7
Аетотопав
(З-Лактама- Бензилпенициллин 5,6;7,6- 5,25 f8 „2,-9,9 [2332J
за II
р-Лактамаза Цефаллоспорин 5,5:9,8 4,2;8,3;10,7 [2332]
FeeucLomonae
*ONp - тг-нитрофениловый эфир; ОР - фениловый ефи] ;
pNA - тг-нитроанилид; Арт - Ы- (3-морфолино) -пропиламид;
