Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 96

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 90 91 92 93 94 95 < 96 > 97 98 99 100 .. 101 >> Следующая

Метод Кербера. Метод Кербера (1931) позволяет вычислять значение ТЦДбо/мл непосредственно на основе данных эксперимента, без предварительного нахождения кумулятивных показателей, как это предусматривает метод Рида и Менча.
Применение метода Кербера (имеется в виду его классический вариант) возможно только в том случае, если среди испытывавшихся доз была доза, вызывающая 100% эффект.
Оригинальная формула Кербера имеет следующий вид:
!g ТЦДи=*о -Eb±?dt
где: Ха—lg дозы, вызывающей дегенерацию во всех зараженных пробирках, второй член — сумма. Каждое из слагаемых этой суммы представляет среднее значение летальности двух соседних доз, умноженное на разность (d) логарифмов между дозами.1
Для ознакомления с техникой вычислений по Керберу воспользуемся результатами опыта, приведенными в табл. 28. В этом опыте дегенерация клеток во всех зараженных пробирках каблю-
далась после внесения вируса в разведении 10-2—10~5. Очевидно, при статистической обработке результатов должна быть принята во внимание только одна из этих доз, а именно 1СНСредняя величина летальности для первой пары разведений (10~5 и
г. 1 "I" п о-? г » /inn i/i i\ 0,75+0,25
10—в) равна ----~----=0,875; для второй (10—6 и 10~7)-----1~— =
= 0,5; для третьей (10~7 и 10“8) — 0,2^+0-~о,125.
Находим значение ТЦДбо для разбираемого примера.
lg ТЦДйц - —¦ 5- (0,875-1-0,5 ¦ 0,125)-1, lg ТЦД5П =- --6,5.
Нередко при работе с малоизученными штаммами или при ограниченном числе пробирок с культурой ткани экспериментатору не удается довести титрование вируса до дозы, дающей 100%’ эффект. В данном случае, как уже упоминалось, оригинальный метод Кербера не может быть использован. Однако ряд авторов на основании весьма сложного теоретического анализа пришел к выводу, что в этих условиях может быть применена измененная формула Кербера.
И. П. Ашмарин (1959) предлагает для вычисления ЕД50 при малом числе подопытных объектов использовать формулу:
lgEDrj0=]gDn 6(ELi—0,5),
где: D„ —доза, дающая максимальный эффект.
Zi —отношение числа животных, погибших при заражении данной дозой, к общему числу животных, которым введена испытуемая доза, i —номер дозы, считая наименьшую дозу первой,
о —логарифм кратности разведений.
Предположим, что титрование штамма MEFi проводили не с разведениями от 10“2 до 10~8, а только с разведениями в пределах от 10_6 до 10-®.
При данных условиях вычисления ТЦДбо мы можем воспользоваться формулой Ашмарина.
Максимальное число пробирок с дегенерацией ткани отмечено после внесения вируса в разведении Ш-6. следовательно:
Логарифм кратности разведения равняется единице. 1« ТЦД;„- -6 0.5) ,
Большим достоинством метода Кербера является возможность вычисления стандартной ошибки. Однако это осуществимо только для тех опытов, в которых испытываются дозы с равными интервалами между ними. Обычно при титровании вирусов в культуре ткани указанное условие соблюдается.
Зная величину стандартной ошибки, можно определить как пределы варьирования значение ТЦД50 при интересующей нас степени точности, так и установить, являются ли различия между несколькими ТЦД50 статистически достоверными.
Значение стандартной ошибки — величины, характеризующей вариабильность средней, находят по формуле:
0= ±уЩй\
где: а — стандартная ошибка ТЦД50,
Е — означает сумму,
р — отношение числа погибших животных (пробирок, в которых отмечена дегенерация) к числу животных (пробирок с культурой), зараженных данной дозой; d=l— р; d — логарифм кратности разведения;
п — число животных (пробирок с культурой ткани), которые заражены одной дозой вируса.
Для примера разберем результаты титрования вируса полиомиелита типа 1 на перевиваемых клетках СОЦ и Нер-2. Как видно из данных табл. 30, при использовании клеток Нер-2 титр исследуемой вирусной суспензии был равен 107-5 ТЦД50/мл. При титровании той же суспензии в культурах клеток СОЦ установлено, что в 1 мл содержится Ш6-67 ТЦД5о. Возникает вопрос, можно ли на основании приведенных данных говорить о неодинаковой чувствительности к вирусу полиомиелита клеток СОЦ и Нер-2?
Таблица 30
Сравнительное титрование вируса полиомиелита типа I в однослойных культурах клеток Нер-2 и СОЦ
Разведение вируса
Вид 10-4 И) ¦5 10“6 ю -1 10- -8 Ю-® - 1? ТЦДй/ыл
клеток
Нер-2 + + + + + + + + I" -i- т -1- -г -1+0 +000 0000 7,5 +0,300
СОЦ -Ы- + + + + + + -Г“Ы~ ^ -! ООО 0000 0000 6,67 ±0,201
Обозначения: 4- дегенерация клеточного слоя, о — нормальный моно-
слой клеток.
Для ответа на этот вопрос нам необходимо убедиться, что разница между величинами ТЦДбо/мл для Нер-2 и СОЦ явля-
ОТ5ТТЛ/>ТИ1ГРГта ппгтптдопнлм
Предыдущая << 1 .. 90 91 92 93 94 95 < 96 > 97 98 99 100 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed