Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Н. А. Зейтленок (1954) разработал быстрый способ вычисления ED50 по методу Рида и Менча без помощи формул. При ана-
ведения 10—6 процент летальности составляет 80, для дозы 10~7—
lg ТЦДМ = - ¦ 6,5.
Таблица интерполяций для вычисления EDjj по числу погибших животных
Ниже В ы чье т 3/5 4/5 4/6 5/6 4/7 5/7 6/7 5/8 6'8 7/8 5/9 6/9 7/9 8/9 10/10
60% 50^
% 75 60 80 67 83 57 72 86 62,5 75 87,5 55 67 78 89 100
1/4 25 50 29 55 40 57 22 47 59 32 50 60 17 40 53 61 67
1/5 20 45 25 50 36 52 19 43 54 29 45 55 14 36 48 57 62
2/5 40 71 50 75 63 77 41 70 78 55 71 79 33 63 74 80 83
1/6 п 43 23 47 34 50 17 40 52 27 43 53 13 34 46 53 60
2/6 33 60 37 СЗ 50 66 29 56 68 43 60 69 23 50 62 70 75
W 14 41 22 45 32 48 16 38 50 25 41 50 12 32 44 52 58
2/7 29 54 32 60 44 61 25 52 63 36 54 64 19 44 57 65 70
3/7 43 78 60 81 71 83 50 75 84 65 78 82 42 71 80 85 88
1/8 12,5 40 21 44 31 47 16 37 49 24 40 49 11 31 42 51 57
2/8 25 50 29 55 40 57 22 47 59 32 50 60 17 40 53 61 67
3,8 37,5 66 43 71 57 73 35 63 75 48 66 74 28 57 70 75 80
1/9 11 39 20 43 30 45 15 36 48 24 39 49 11 30 42 50 56
2/9 22 47 26 52 38 54 20 44 53 30 47 57 15 38 50 58 64
3/9 33 60 37 63 50 66 29 56 68 43 60 69 23 50 62 70 75
4/9 44 ?0 63 83 74 84 54 79 86 67 80 86 45 74 82 87 89
0/10 0 33 17 37 25 40 12 30 42 19 33 43 ОЭ 25 36 44 50
Обозначения: числитель — кумулятивное число погибших животных, знаменатель — кумулятивное число зараженных животных.
лизе многочисленных расчетов, выполненных по указанному методу, он^ установил, что для каждого конкретного отношения кумулятивной летальности к общему числу животных при испытании высшей критической и сопряженной низшей критической дозы существует определенное значение характеристики логарифма EDso- Н. А. Зейтленок суммировал свои наблюдения в специальной таблице, составленной на основании анализа результатов опытов, в которых для заражения соответствующим разведением использовали по 4 животных {табл. 29).
Техника вычисления, рекомендованная Н. А. Зейтленком, сводится к нахождению кумулятивных значений для высшей и низшей критической дозы и последующего определения в соответствующей таблице по этим данным характеристики логарифма ED50. Полученную величину прибавляют к мантиссе логарифма высшей критической дозы и получают искомое значение логарифма 50% летальной дозы.
Как было показано, высшая критическая доза штамма MEFi вируса полиомиелита при титровании в культуре клеток почек обезьян представлена разведением исследуемого материала 10—6, низшая—разведением 10~7. Для первой дозы отношение кумулятивного числа пробирок с дегенерированными клетками к общему числу инокулированных культур составляет 4 :5, для второй дозы—1:5. По табл. 29 находим, что при таких значениях мантисса lg EDso равна 0,50. Логарифм высшей критической дозы равен —6, следовательно, lg ED50 соответствует
Пизи (1952) разработал специальную формулу для нахождения стандартного отклонения для ED50, высчитанного по методу Рида и Менча на основании данных одного эксперимента.
где: h — интервал между испытуемыми разведениями инфекционного материала, выраженными в виде логарифмов;
Я—-интервал между дозами, дающими 25 и 73% эффекта, выраженными в виде логарифмов, или удвоенный интервал между значениями логарифма EDso и логарифма одной из указанных доз; п — число пробирок, зараженных данным разведением вируса. При рассмотрении данных опыта, приведенных в табл. 28, становится очевидным, что для вычисления стандартного отклонения необходимо предварительно найти значение логарифма кумулятивной дозы, дающей 25 и 75% эффекта. Используем для этой цели прием интерполирования.
6,5.
-lg ED^e.O-H-l^g; -lg ED2?^6,92.
~-lg EDT3=6,0-H ¦ ; ~lg ED75=6,08.
WU-' At
На основании этих данных находим значение стандартного отклонения.
aED„=-
V________ 4
oEDi0= + , /^9.-.0-74 ; oED3l,= ±0,4.
I 4
Зная величину стандартного отклонения, мы можем легко определить возможные вариации EDgo, обусловленные неизбежными при постановке эксперимента техническими погрешностями. Для данного примера колебания EDs0 в пределах от 6,5+0,4 до 6,5—0,4 следует признать несущественными, так как они не выходят за пределы погрешности метода.
Формула Пизи заслуживает внимание при постановке опытов, в которых наряду с исследуемым материалом проводят титрование инфекциозности или вируснейтрализующей активности стандартного препарата. После приготовления такого стандарта и определения его активности на основании формулы Пизи можно без особого труда определить возможные колебания EDso при условии строгого соблюдения методики в последующих экспериментах. Если при повторных исследованиях будут получены значения EDso, выходящие за ожидаемые пределы, то следует искать ошибку методического порядка, допущенную при постановке опыта, или предположить, что по своей чувствительности использованная для титрования модель отличалась от применявшихся ранее.
