Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 94

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 101 >> Следующая

Штамм Разведение вируса
10-2 10-3 10-4 10~ 5 in-6 10~7 10---6
+ + + + 4- + + + +++ + + г + + +++ + 0
-г + + + ++++ + +++ + + + + ++++ 0 0
MEFj +++ + ++ + + + +-Ь + + -+-(- + +++ + 0 0
+++ + + -*-++ + + + + _j- _U 0 0 0
Обозначения: + + + + полное разрушение клеток, 0 клетки нормальные.
Разберем на примере расчет ED50, точнее дозы, вызывающей цитопатогенные изменения в половине зараженных пробирок. В табл. 27 представлены результаты титрования вируса полиомиелита II типа в однослойных культурах клеток почек обезьян. Методика опыта была обычной: разведение вируса в среде 199 без сыворотки в объеме 1 мл вносили в пробирку. Результаты учитывали на 7-е сутки. Как видно из данных табл. 27, вирус в
разведении I0-3, 10 * и 10 5 вызывал разрушение ткани во всех пробирках. После заражения разведением 10-® цитопатогенное действие было отмечено в 3 пробирках из 4; при введении вируса в разведении 10~7 дегенерацию клеток наблюдали лишь в одном случае.
Рассмотрим, в какой мере данные приведенного опыта удовлетворят требованиям, которые должны соблюдаться при расчетах по методу Рида и Менча. Интервалы между логарифмами во всех случаях составляют единицу, каждое разведение вируса вносили в 4 пробирки с культурой ткани. Следовательно, первые два из трех указанных условий соблюдены. Для выполнения третьего условия отбрасываем разведения 10-2, 10-3 и 10—4. Оставшиеся дозы вызывают дегенерацию в 100, 75, 25 и 0% случаев. Иными словами, их эффекты расположены симметрично по отношению к 50%, что дает право провести расчеты по методу Рида и Менча.
Вычислим кумулятивные данные для каждой испытанной дозы вируса (табл. 28).
Таблица 28
Обработка результатов титрования вируса полиомиелита в культуре ткаки по методу Рида и Менча
Разве Число Число Процент Кумулятивные данные Отношение Процент
число число
нормаль культур
ных с дегене*
культур рацией
клеток

,0~2 0 4 100
1<Г3 0 4 100 --- ---
10“4 0 4 100 --- ---
10---5 0 4 100 0 8 8:8 100
10-® 1 3 75 1 4 4:5 80
1(Г7 3 1 25 4 1 1:5 20
10“8 4 0 0 IS 0 0:8 0
В разведении 10_8 кумулятивное значение летальности, т. е. число пробирок с разрушенной вирусом тканью, будет равно 0, При испытании указанного разведения было использовано 4 пробирки с нормальной тканью. Однако к ним следует прибавить
3 пробирки, в которых клетки не были разрушены после добавления вируса в разведении 10—7 и 1 пробирку, зараженную разведением 10—6. Таким образом, предполагая, что культуры, не разрушенные большими дозами вируса, не будут инфицированы при внесении меньших количеств инфекционного материала, определяем кумулятивное число пробирок с нормальными клетками для разведения 10~8. Оно равно 8. Рассуждая аналогичным образом, устанавливаем, что для дозы 10~7 число незараженных
пробирок составляет 4, для дозы 10~6—I. При нахождении кумулятивные значения летальности к общему числу пробирок с куль-турой ткани, разрушенной после заражения данной дозой, следует прибавить те культуры, в которых наблюдали дегенерацию после внесения меньших доз. Так, к 4 пробиркам с клетками, де-генерированными после инокуляции вирусом в разведении 10—5, мы должны прибавить 3 пробирки с разрушенными клетками при испытании разведения 10-6 и 1 пробирку, в которой было отмечено развитие цитопатогенного эффекта после внесения вируса в разведении 10~7, Таким образом, кумулятивное число пробирок с пораженными клетками для разведения 10~5 равнялось 8.
На основании полученных кумулятивных данных определяем кумулятивный процент летальности. Искомая величина представляет отношение кумулятивной летальности к сумме кумулятивной летальности и выживаемости. Само собой разумеется, что полученная величина должна быть умножена на 100.
Для разведения 10~3 кумулятивная летальность равна 8, выживаемость— 0, их сумма — 8. Процент кумулятивной летально-
20, для дозы 1О-8—0.
Очевидно, доза, вызывающая дегенерацию в 50% зараженных пробирках с клетками, находится между разведением 10_6
Таким образом, для исследуемого штамма MEF 50% цитопа-тогенная доза равна Ю-6-5. Учитывая, что объем каждого испытанного разведения составлял 1 мл, легко вычислить концентрацию вируса в неразведенном материале. Она равняется 106'5 ТЦД50 в 1 мл. В том случае, когда вирус титруется в объеме меньшем, чем 1 мл (0,1; 0,25; 0,3 мл и т. д.), это необходимо учитывать при определении содержания вируса в исходном материале. Так, если титр равен 105,9, а культуру ткани заражали 0,2 мл инфекционного материала, то конечная концентрация вируса будет равна 105,9 - 5 в 1 мл. Путем логарифмирования приходим к более простому выражению 10s'54 (lg 109-5 -5,9; lg=0,64). При необходимости определить абсолютное число ТЦД50 по таблице антилогарифмов находим интересующую нас величину. Для конкретного примера она составляет 3890 000 ТЦДю/мл.
Предыдущая << 1 .. 88 89 90 91 92 93 < 94 > 95 96 97 98 99 100 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed