Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 88

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 82 83 84 85 86 87 < 88 > 89 90 91 92 93 94 .. 101 >> Следующая

19-10000
0,2
И4=8.5-10®:
А 3JOOOOO 0,2
Известно, что точность результатов титрования возрастает при увеличении количества подсчитанных колоний. Однако было бы неверным использовать для количественного учета флаконы с очень большим числом бляшек — порядка 100—200. При данных условиях точность подсчета будет страдать не только в силу технических трудностей, но также и потому, что значительное число бляшек будет сливаться, образуя одну колонию (рис. 38).
Зная диаметр бляшек, число клеток во флаконе и разведение вносимого вируса, можно высчитать для данных условий опыта число колоний, образовавшихся в результате слияния. Такие расчеты были проведены Делбекко и Фогт (1954) для вируса полиомиелита I типа. Исследуемый вирус вызывал появление бляшек диаметром 3 мм. Было высказано предположение, что расстояние 3 мм между центрами двух соседних бляшек является необходимым для их распознавания. Вероятность того, что на участке ткани диаметром
3 мм образуется две или более бляшек, была высчитана по формуле распределения Пуассона:
где: Р1 — число бляшек, N—число клеток в культуре,
v — число вирусных частиц, адсорбировавшихся на слое клеток.
Ожидаемое количество бляшек высчитано по следующей формуле:
Рис. 38. Сливные бляшки, образованные вирусом полиомиелита.
(2)
Р1--
!>/v( 1-е Л- ). (3)
где: е — 2,71, а — коэффициент, определяемый эмпирически.
Для небольшого числа бляшек может быть применена другая формула:
Pl~a-v.
Сопоставляя величины, полученные с помощью формулы (2) ,т 1ч\ TTenfSpicirn и Фогт установили, что при внесении в чашку
Петри диаметром 60 мм 100 бляшкообразующих доз формируется 84 колонии, из которых 15 возникают за счет слияния. При инокуляции 50 вирусных частиц образуется 46 бляшек, из них
4 имеют множественное происхождение. При заражении культуры 10 дозами появляются 10 колоний.
Авторы рекомендовали при титровании вируса полиомиелита методом бляшек в однослойных культурах, выращенных в чаш» ках Петри диаметром 60 мм, использовать только те чашки, в которых число колоний не больше 40—50. Однако и при таких условиях около 10% бляшек не могут быть учтены в результате слияния.
Важное значение, особенно при использовании метода бляшек, для генетических исследований имеет не только количественная, но и качественная характеристика бляшек — определение их размера, регистрация срока появления, описание характера краев и т. д.
Сюн и Мельник (1955) подробно описали морфологию бляшек различных представителей кишечной группы вирусов. По их данным, вирусы полиомиелита I, II и III типа вызывают образование изолированных колоний в однослойных культурах клеток почек обезьян на 2—3-й день после заражения. Эти колонии имеют круглую форму и четкие края. Бляшки вирусов Коксаки В-I, В-2, В-3, В-4 и В-5 по своей морфологии напоминают бляшки вирусов полиомиелита, однако в отличие от последних они появляются на 1—2 дня позже. Вирус Коксаки А-9 вызывает на 2—3-й день после заражения культур ткани образование круглых больших колоний с диффузными краями. Вирусы ECHO типа I и 13 появляются на 4—5-й день, типа 3, 4, 9, 14 — на 5—6-й, типа 11 — на 7—10-й, типа 7, 8—на 3—4-й день. Колонии вирусов ECHO менее постоянны по размерам по сравнению с. колониями вирусов полиомиелита, их границы расплывчаты и под микроскопом можно видеть среди разрушенной ткани единичные живые клетки.
Сюн и Мельник (1957) отметили, что почечные культуры обезьян макак резус и Erythrocebus patas различаются по своей чувствительности к разным кишечным вирусам. На основании этих различий они предложили выделить две группы вирусов ECHO.
1. Группа А. В нее входят ра1аз-иегативные штаммы. Эти штаммы относятся к вирусам ECHO типа I, 3, 4, 6, 9, 11, 13 и 14. Они не образуют бляшек в клетках почечного эпителия Erythrocebus patas. В культурах макаки резус бляшки указанных вирусов имеют мелкие размеры, неправильные очертания.
2. Группа В, patas-положительная. Представлена вирусами ECHO типа 7, 8, 12, 15, 16, 17, 18, 19. Эти вирусы вызывают появление бляшек в клетках почечного эпителия макак резус и Erythrocebus patas.
Значительные различия в величине и сроке появления бляшек были отмечены Портерфилдом (1959) при изучении боль-
шого числа трансмиссивных вирусов. В однослойных культурах куриных фибробластов вирус желтой лихорадки (штамм 17 Д) вызывает появление бляшек на 4-е сутки. Диаметр бляшек равняется 2—3 мм, края диффузные, часто в центре колоний находят живые клетки, окрашенные нейтральным красным. Бляшки вируса японского энцефалита В, западнонильского энцефалита, Уганда S и Вессельброн образуются на 2—3-й день после заражения культур и постепенно увеличиваются до 5 мм в диаметре. Вирус Зика вызывает появление колоний только на 4—5-й день, а шотландского энцефалита — на 7-й день. Бляшки последнего вируса не превышают в диаметре 2—3 мм и очень нечетко выделяются на фоне живых клеток.
Предыдущая << 1 .. 82 83 84 85 86 87 < 88 > 89 90 91 92 93 94 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed