Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 82

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 101 >> Следующая

Бакли указывает, что при определении антител в сыворотках к вирусу киасанурской лесной лихорадки в опытах на мышах и с помощью реакции гемадсорбции получены одинаковые результаты. Интересно отметить, что при обследовании сывороток людей, вакцинированных против весенне-летнего клещевого энцефалита, в реакции задержки гемагглютинации она получила отрицательные результаты. Однако в этих же сыворотках с помощью предложенного Бакли метода удалось обнаружить антитела к вирусу весенне-летнего клещевого энцефалита.
ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ И АНТИТЕЛ БЛЯШКАМИ (ПЯТНАМИ) ПО ДЕЛБЕККО
Одним из важных результатов внедрения в вирусологическую практику культур ткани явилась разработка методов, позволяющих выявить действие отдельных вирусных частиц. В 1952 г. Делбекко полу.чил изолированные колонии вируса западного лошадиного энцефаломиелита. В последующие годы разные авторы с успехом применяли метод бляшек для изучения вирусов полиомиелита [Янгнер (Joungner, 1956)], Коксаки, ECHO [Сюн, Мельник (Hsiung, Aleinik, 1955)], многих трансмиссивных вирусов (желтой лихорадки, японского, западнонильского, шотландского энцефалитов и т. д.) {Гендерсон, Тейлор (Henderson, Taylor, 1959); Портерфилд (Porterfield, 1959], гемадсорбирующего вируса типа I [Дейбел (Deibel, 1959)], кори (Андервуд, 1959), а также ряда возбудителей вирусных заболеваний домашних животных и птиц — вируса ящура (Динтер, Сибалин (Dinter, Sibalin, 1958)], везикулярного стоматита и нькжасльской болезни [Райт, Сагнк (Wright, Sagin, 1958)].
Метод бляшек нашел широкое применение при разработке некоторых проблем теоретической и практической вирусологии (получение чистых линий вируса, изучение закономерностей реакции нейтрализации, процессов взаимодействия вируса и клетки) и оказался незаменимым при исследовании генетики вирусов.
Существует несколько отличных друг от друга методов получения изолированных колоний вируса в однослойных культурах клеток. Однако все они по существу являются модификацией или усовершенствованием оригинального метода, предложенного Делбекко. Поэтому мы считаем необходимым дать краткое изложение этого метода, несмотря на то что в последнее время в оригинальной прописи он уже не находит широкого применения.
Методика постановки опыта в первых работах (Делбекко и Фогт, 1959); Нойс (Noyes, 1953); Краноф (Cranoff, 1953); Ледин-ко, 1955; Мак Клейн, Хаккет (McClain, HacKett, 1958) сводилась к следующему. В чашках Петри выращивали однослойные культуры клеток (почечного эпителия или фибробластов семенников обезьян пои исследованиях вируса полиомиелита; фибробластов
куриных эмбрионов при экспериментах с вирусом западного лошадиного энцефаломиелита). Перед заражением из чашек сливали среду и промывали клеточный слой фосфатным буфером, после чего на клетки наносили 0,3 мл соответствующего разведения вируса, приготовленного на буферном растворе. Инфицированные культуры оставляли на 30 минут при 37э для адсорбции вируса клетками. Затем в чашки «Петри вносили 3 мл расплавленной (43°) смеси агара с питательным раствором. Черёз 5—10 минут после того, как покрытие затвердевало, чашки переносили в термостат, в который для поддержания pH в необходимых пределах непрерывно подавали смесь воздуха с 3% С02.
В состав агарового покрытия входили следующие компоненты: 1) 12 частей 2,7% агара на дистиллированной воде, 2) 12 частей нейтрального красного в концентрации 1 : 10 ООО, 3) 8 частей раствора Эрлз (4-кратная концентрация, pH 7,4 устанавливали пропусканием через раствор СОг), 4) 5 частей куриного эмбрионального экстракта. Агар перед постановкой опыта расплавляли на водяной бане н осторожно охлаждали до 43°. Компоненты 2, 3 и 4 нагревали до 43°, после чего добавляли к агару.
Изложенный метод был с успехом использован при изучении не только вирусов полиомиелита и западного лошадиного энцефаломиелита, но и при экспериментах с вирусами гриппа, инфекционного бронхита, ньюкасльской болезни, восточного лошадиного энцефаломиелита, герпеса простого, осповакцины (Краноф, 1959; Райт, Сагик, 1958).
Рядом авторов были предложены разные модификации метода Делбекко, причем изменения касались в основном состава агарового покрытия и соотношения между его составными компонентами. Так, Янгнер (1956) рекомендовал использовать смесь равных частей 2,7% агара, нейтрального красного в концентрации 1 :10 000 и питательной среды. В состав последней входили 30 мл раствора Хэнкса в 10-кратной концентрации, 55 мл 1% дрожжевого экстракта, 6 мл 5% раствора кристаллического альбумина и
9 мл 5% раствора соды. Каплан (1957) в экспериментах с вирусом герпеса использовал покрытие, содержащее 4 части 2,25% агара в водном растворе нейтрального красного, 5 частей раствора Эрла двойной концентрации с 1 % лактальбумина и 1 часть бычьей сыворотки. При получении изолированных колоний вируса папилломы Делбекко и Фриман (1959) применяли смесь, содержавшую 0,3% агара в среде Игла и 2% лошадиной сыворотки.
Существенным недостатком оригинального метода Делбекко и его модификаций является необходимость использовать для предупреждения изменений pH термостаты с подачей ССЬ. Были сделаны попытки ввести в состав покрытия органический буфер трис, однако в связи с известной сложностью приготовления он не нашел широкого применения.
Предыдущая << 1 .. 76 77 78 79 80 81 < 82 > 83 84 85 86 87 88 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed