Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 78

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 101 >> Следующая

0,5--0,8 мл вазелинового масла.
Протокол титрования трех типов вируса полиомиелита в цветной реакции представлен в табл. 19,
При постановке цветной реакции ставят следующие контроли.
1. Контроль токсичности ставят с каждой сывороткой. К 0,25 мл наименьшего разведения сыворотки добавляют 0,25 мл среды, 0,25 мл взвеси клеток и 0,5—0,8 мл вазелинового масла.
Таблица 20
Нейтрализация вируса полиомиелита в цветной реакции сывороткой А
Разведение сыворотки Титр
Сыво Тип 1:8 I ¦ 26 1 :32 1 :64 1: 128 1 1 :512 1 ;1021 1 :2Ж сыво
ротка вируса ротки.
[ ЖЖ ЖЖ жж жж кк к к НК кк кк 6,5
ЖЖ жж жж жж кк кк кк кк кк
А II жж жж кк кк кк кк кк кк кк 3
жж кк К 1C кк кк кк кк к к кк
III * X жж жж жж жж жж жж жж кк 10
* * жж жж жж жж ж ж жж кк кк
Контроль дозы вируса
Разведение вируса
Тип вируса ltr 2 иг* 10-4 10~5 10~6 о 10---8 Титр вируса
) в 0,25 мл
Ь-1
т кк кк кк кк жж 106'5
кк к к к к кк жж
II кк кк кк кор жж ж ю5
кк кк кк жж жж жж
III кк кк кк жк жж ю7
кк кк кор ж к жж
Контроль дозы клеток
Число 1 доза '/2 дозы 'U дозы
клеток (25 000) (12 500) (« 250)
Результат ж ор к
ж °р к
Обозначения те же, что в табл. 19.
2. Контроль дозы вируса. Из рабочего разведения вируса, содержащего 100 ТЦДбо, для получения соответственно 10; 1; 0,1 ТЦД50 готовят три последующих 10-кратных разведения. Каждое из этих разведений вносят по 0,25 мл в 4 пробирки, за* тем прибавляют по 0,25 мл среды, по 0,25 мл клеток и по 0,5— 0,8 мл вазелинового масла.
3. Контроль дозы клеток ставят по такой же методике, как и при титровании вируса. Реакцию выдерживают при 36—37° и учитывают на 5—7-е сутки.
Приводим реакцию нейтрализации трех типов вируса полиомиелита сывороткой А (табл. 20).
По данным контроля, сыворотка для культуры клеток не токсична. Доза клеток выбрана правильно, так как эта доза изменяла цвет среды до ярко-желтого, половина дозы — до оранжево-розового и четверть дозы не вызывала изменения цвета среды.
По расчетам предыдущих титрований вируса в реакцию для получения 100 ТЦД50 вирус I типа был взят в разведении 10—4,
II типа— 10—3 и III типа—10~5. Но контрольное титрование вируса показало, что вируса типа I было взято не 100 ТЦД50, а 320, вирусов типов II и III содержалось по 100 ТЦД50. Титр антител (lgio) к вирусу типа I был равен 6,5, ко II типу—3 и к
III типу— 10.
Высокая стоимость обезьян, трудоемкость процессов, связанных с получением культур почечного эпителия обезьян, и нередкая их зараженность, а также и других подопытных животных латентными вирусами побудили исследователей использовать для постановки цветной пробы перевиваемые клетки. В настоящее время с этой целью предложены клетки HeLa, СОЦ, КВ, Нер-2 и клетки карциномы Эрлиха.
Наиболее часто для постановки цветной реакции используют штамм перевиваемых клеток HeLa.
Многие авторы подчеркивают, что главная трудность проведения цветной реакции с клетками HeLa состоит в правильном подборе среды. При применении сред, которые используют для размножения клеток, уровень метаболизма очень высок, поэтому сдвиг pH в кислую сторону происходит до того, как разовьется патогенное действие вируса. Было предложено несколько различных по составу сред для постановки цветной пробы с клетками HeLa. Общими для этих сред являются pH, близкий к 8,0 и способность поддерживать обмен клеток при таком значении pH.
Впервые клетки HeLa были использованы для постановки колориметрического теста Робертсоном, Бруннером и Сивертоном (Robertson, Brunner, Syverton, 1955). В состав среды для разведения вируса и сывороток входили: 1 % раствор дрожжевого экстракта Дифко—10 мл; 10% раствор глюкозы—3,5 мл; раствор Хэнкса без соды — 86 мл; пенициллин и стрептомицин из расчета 100 ЕД/мл. Добавлением 0,6 мл 1% раствора NaHC03 pH среды
'Т А I А П Г-\--- уч»гтт,л.«тпт»1тгт гч ЛЛ пАЛТОТ)
12% куриной или обезьяньей сыворотки, не содержащей ингибиторов вируса полиомиелита типа 1, II и III, применяли для приготовления клеточной взвеси, pH которой доводили до 7,9. Штативы с пробирками помещали в термостат при 37°, Результаты опыта учитывали на 7-й день.
Липтон и Штейгман (Lipton, Steigman, 1955) предложили для постановки цветной реакции с клетками HeLa среду следующего состава: среда 199 — 95% с концентрацией глюкозы 400 мг% нормальная обезьянья сыворотка — 5%, С помощью 4,5% раствора бикарбоната натрия pH среды доводили до 7,6. В каждую пробирку вносили 50 ООО клеток в объеме 0,25 мл.
Предыдущая << 1 .. 72 73 74 75 76 77 < 78 > 79 80 81 82 83 84 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed