Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 75

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 69 70 71 72 73 74 < 75 > 76 77 78 79 80 81 .. 101 >> Следующая

Таблица 17
Титрование вируса, весенне-летнего клещевого энцефалита на белых мышах и в культуре ткани почечного эпителия эмбриона свиньи по цитопатогенному действию
Число Совпадение Разность Ig LDK и lg ТЦДИ
опытов результатов <1 <3 «3 >3
84 19 28 21 14 2
Как видно из данных табл. 17, совпадение значений ТЦД50 и LDso было в 19 случаях. В большинстве опытов (49 из 84) величина ТЦДш была на 1—2 единицы логарифма ниже, чем LDso-
Значительные трудности, связанные с регулярным получением ночек свиней или их эмбрионов, стимулировали работы по полу-чению перевиваемых линий почечного эпителия свиней. В Чехословакии такая линия была выведена Патока, в Советском Союзе— К- С. Куликовой (1960).
Корич (1960), исследуя чехословацкую линию, наблюдал быструю дегенерацию клеток, зараженных вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита. При исследовании нескольких штаммов в культуре ткани установлено, что они обладают различной цито-патогенной активностью. При титровании штамма «Хипр» на мытах (внутримозговые введения) и заражением пробирок с клетками были получены совпадающие результаты. В опытах со штаммом «Нанзалова» величина ТЦД50 была на 1 —1,5 логарифма ниже по сравнению с LD50.
Н. Н. Богомолова (1960) наблюдала развитие цитопатогеиного эффекта в перевиваемых клетках почечного эпителия свиней при заражении мозговой суспензией штамма Софьин.
ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ И АНТИТЕЛ В ЦВЕТНОЙ
РЕАКЦИИ
Основные принципы цветной реакции (синонимы: цветная проба, колориметрический тест) разработаны Солком, Янгнером н Уордом (Solk, Youngner, Ward, 1954). Они предложили использовать для титрования вирусов полиомиелита феномен, отмеченный Роббинсом, Эндерсом и Уеллером ^1950). Эти авторы при работе с кусочками тканей, фиксированными на стекле, обнаружили, что при размножении вируса полиомиелита в культурах ткани pH среды, как правило, значительно выше, чем pH в контрольных культурах.
Следует отметить, что подавление метаболизма клеток при размножении вируса было отмечено значительно раньше Хуангом (1943). Им было установлено, что при заражении культур куриного эмбриона вирусом западного лошадиного энцефаломиелита pH среды не изменялся, тогда как в культурах, к которым была добавлена смесь вируса с иммунной сывороткой, pH сдвигался в кислую сторону.
Солк, Янгнер и Уорд (1954) предложили использовать суспензии трипсинизированных клеток почек обезьян и среду 199. Мельник и Оптон (Melnik, Opton, 1956) упростили и усовершенствовали метод постановки цветной реакции: они заменили суспензию трипсинизированиых клеток клетками первой генерации, вместо среды 199 ввели среду с 0,5% лактальбумина и 2% телячьей
сыворотки и показали возможность проведения опытов не в про-бирках, а на пластинах с углублениями.
В модификации Мельника и Оптона цветная реакция вошла в практику большинства лабораторий и применяется при изучении различных вирусов.
Эта реакция основана на изменении цвета питательной среды, содержащей индикатор pH феноловый красный.
В результате жизнедеятельности клеток в культуре ткани в питательную среду выделяются продукты, снижающие концентрацию водородных ионов среды, вследствие чего меняется и цвет самой среды. В том случае, если клетки культуры ткани инфицируются вирусом полиомиелита и погибают, цвет питательной среды не меняется.
Свежая питательная среда с pH 7,4—7,8, содержащая феноловый красный, имеет красный цвет. При снижении pH до значений 7,0 и ниже цвет питательной среды становится оранжево-розовым и, наконец, желтым. Таким образом, по цвету среды в пробирках с культурой ткани, на которых проводят титрование вируса, судят о его присутствии или отсутствии.
^ Для цветной реакции могут быть использованы как первичные однослойные культуры клеток, полученные из трипсинизиро-ванных тканей разных животных, так и различные перевиваемые штаммы клеток, чувствительные к исследуемым вирусам.
Кроме того, весьма важным и подчас решающим успех реакции является правильно взятая доза клеток. Существенное значение имеет также стабильность метаболической активности клеток. В связи с этим при использовании новых, не применявшихся ранее в опытах видов клеток следует исследовать их метаболическую активность и ее стабильность.
Ниже мы приводим результаты исследований, проведенных для определения метаболической активности и ее стабильности у клеток почек обезьян макака резус и перевиваемых клеток СОЦ, Нер-2 и HeLa.
Была применена методика титрования клеток, основанная на изменении цвета индикатора фенолового красного в питательной среде 0,5% гидролизата лактальбумина в растворе Хэнкса с 2% телячьей сыворотки при исходном pH 7,5. В опыт отбирали матрасы со сплошным ростом клеток (перевиваемые штаммы клеток
4—5-суточного возраста и 6—7-суточную культуру клеток почек обезьян). Старую питательную среду удаляли, к клеткам в матрас Ру прибавляли 40—50 мл подогретого до 36° 0,02% раствора версана, чтобы он покрывал клетки. Матрасы в горизонтальном положении помещали в термостат при 36—37° на 40—45 минут. Каждые 10 минут матрас энергично встряхивали. По истечении 40 минут клетки отделялись от стекла. Взвесь клеток собирали в центрифужные стаканы и центрифугировали 10 минут при 1000 об/мин или отстаивали в пробирках размером 30x300 мм ппи 4° r течение cvtok. Надосадочный раствор версена удаляли
Предыдущая << 1 .. 69 70 71 72 73 74 < 75 > 76 77 78 79 80 81 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed