Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
роткой. Пробирки помещают в термостат, результаты учитывают на 5—6-й день. По сообщению авторов, предложенный метод хорошо воспроизводим и позволяет достаточно надежно определять антитела в сыворотках.
Цейпель и Сведмир (Zeipel, Svedmyr, 1958) описали цитопа-тогенное действие вируса шотландского энцефаломиелита и штаммов вируса весенне-летнего клещевого энцефалита в культурах клеток Дейтройт-6. Вирус шотландского энцефаломиелита после 23 пассажей в клетках HeLa и 12 пассажей в клетках Детройт-6 вызывал цитопатогенные поражения в тех же разведениях, что и вирус, пассируемый на мышах. При исследовании этих двух линий титр в LD50 и ТЦД5о был соответственно 8,2 и 7,5.
При постановке перекрестной реакции нейтрализации в культуре ткани с сыворотками иммунизированных животных или реконвалесцентов отмечено некоторое антигенное различие между вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита и вирусом шотландского энцефаломиелита. Однако, по мнению авторов, это различие не столь велико, чтобы помешать использовать гашение цитопатогенного эффекта вируса шотландского энцефаломиелита для определения в сыворотках антител к вирусу весенне-летнего клещевого энцефалита. Оптимальными условиями для реакции нейтрализации являются 10-’3 2,9 ТЦД вируса и выдерживание смеси вируса с сывороткой в течение 1 часа.
Л. Г. Карпович и Г. Д. Засухина (1959) описали цитопатоген-ное действие вирусов весенне-летнего клещевого энцефалита, шотландского энцефаломиелита и двухволнового менинго-энцефалита в культуре клеток СОЦ. Указанные вирусы вызывали четкие деструктивные изменения уже при первичном заражении. Развитие цитопатогенного эффекта наблюдали также при пассажах этих вирусов в культуре ткани. Специфичность цитопатогенного действия доказана с помощью реакции нейтрализации. При сравнительном титровании вируса в культуре ткани и на мышах получены практически одинаковые результаты.
При оценке различных данных о титровании вирусов весенне-летнего клещевого энцефалита в перевиваемых клетках следует иметь в виду, что в большинстве случаев результаты, полученные в одной лаборатории, не воспроизводятся или воспроизводятся неполностью в других лабораториях. Так, Данеш (1957) исследовал размножение вирусов весенне-летнего клещевого энцефалита, выделенных в Чехословакии и в СССР, в 4 линиях клеток HeLa. Несмотря на многочисленные опыты, ему не удалось наблюдать регулярного развития цитопатогенного эффекта.
Н. Н. Богомолова (1950) не отмечала развития цитопатогенного эффекта в культурах клеток Детройт-6, А. В. Дубов, исследуя другую линию, регулярно обнаруживал разрушение клеток, зараженных вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита.
Большинство исследователей не подтвердили данных Л. Г. Карпович и Г. Д. Засухиной (1959) о цитопатогенном дей-
ствйи вирусов весенне-летнего клещевого энцефалита на клетки СОЦ. Отрицательные результаты при работе с. этими клетками получили Н. Н. Богомолова, Б. Ф. Семенов, Г. М. Степанов (1960), А. Т. Кравченко и В. Н. Васильев (I960), Корич (1960). А. В. Дубов отмечал появление дегенерации клеток СОЦ после заражения вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита. Однако в отлитие от J1. Г. Карпович и Г. Д. Засухиной титр, выраженный числом ТЦД50, был в 1000—10 000 раз ниже LD50, вычисленной по результатам внутримозгового титрования на белых мышах.
Несоответствие результатов при изучении возможности количественного исследования вирусов весенне-летнего клещевого энцефалита в стабильных клеточных линиях связано, вероятно, с несколькими причинами. Одной и, возможно, наиболее существенной является определенная изменчивость перевиваемых клеток. Об этом свидетельствуют данные В. И. Ильенко (1960). Она исследовала три линии клеток HeLa. Одна была получена из Братиславы, другая — из Хельсинки, третья — из Парижа. В первых двух клеточных линиях вирус двухволнового менинго-энцефа-лита хорошо размножался и вызывал цитопатогенные изменения, во французской линии вирус размножался, однако клеточных изменений не наблюдалось.
В последнее время внимание исследователей привлекла культура почечного эпителия свиней. В этих клетках, по наблюдениям Вильямса (Viliams, 1958), хорошо накапливается вирус шотландского энцефаломиелита. Деструктивное действие, оказываемое вирусом на культуры почечного эпителия свиней, дало основание для использования их при титровании данного вируса и постановки реакции нейтрализации.
Керекьярто и Хиероними (KereKjarto, von Hieronymi, 1958) описали цитопатогенпый эффект в свиных почечных клетках, зараженных вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита.
Б. Ф. Семенов, Н. Н. Богомолова и И. И. Акопова (1961) наблюдали накопление вируса весенне-летнего клещевого энцефалита в культурах почечного эпителия эмбрионов свиней, сопровождавшееся деструкцией зараженных клеток.
Н. Н. Богомолова, Б. Ф. Семенов и Г. М. Степанов (1960) исследовали возможность использования этих культур для титрования вируса весенне-летнего клещевого энцефалита по его цитопатогенному действию (табл. 17).
