Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Заметим, что в некоторых случаях все же возможны отклонения от описанной выше картины типичного цптоиатегенного действия вируса кори. Так, Эндерс, Пиблз и др. (1957) в процессе многочисленных последовательных пассажей штамма Эдмонстон вируса кори на первичных культурах амниотических клеток человека наблюдали постепенное уменьшение количества симпластов в зараженных культурах. Одновременно усиливались дегенеративные изменения второго типа (образование веретенообразных, а иногда и звездчатых клеток). К 28-му пассажу этот тип цитопатогенного действия стал преобладающим.
Для титрования вируса кори на однослойных культурах почечных клеток человека готовят возрастающие 10-кратные разведения вируса. По 0,1 мл каждого разведения вносят в несколько пробирок с культурами. Пробирки инкубируют в течение 2 недель, учет результатов производят по характеру цитопатогенного действия вируса. Для установления нарастания титра антител в парных сыворотках детей, переболевших корью, Эндерс и Пиблз (1954) использовали постоянную дозу вируса в количестве 100 ТЦДбо, которую соединяли с каждой из указанных сывороток и после контакта вводили в несколько пробирочных культур.
В последние годы для количественного определения вируса кори и антител к этому вирусу все шире используют перевиваемые клетки. Причиной этого является не только большая, экономич-
ность и простота приготовления по сравнению с первичными культурами, но также и то обстоятельство, что цитопатогенные изменения в культурах перевиваемых клеток появляются значительно раньше. Так, например, Френкель и Вест (1958) показали, что в культурах перевиваемых амниотических клеток человека участки некроза и симпласты появляются уже через 2—3 дня после заражения, тогда как в первичных культурах амниотических клеток эти изменения происходят значительно медленнее, а для полного цитолиза нередко требуется до 4 недель. При введении в культуры перевиваемых амниотических клеток малых доз вируса полная дегенерация наступает в течение 7—14 дней. Внутриядерные и цитоплазматические эозинофильные включения также появляются уже через 3 дня после заражения.
Френкель и Вест (1958) предлагают следующую методику приготовления культур амниотических клеток для титрования вируса кори. В пробирки вносят по 50 000 клеток, взвешенных в среде 199 с 10°/о прогретой телячьей сыворотки. Через 3—4 дня в пробирках образуется сплошной клеточный пласт, после чего питательную среду удаляют и вместо нее вносят среду 199 или раствор Игла, содержащие 10,% прогретой телячьей сыворотки.
Заслуживает внимания также и простая методика титрования вируса кори на культурах клеток HeLa, предложенная Андервудом (Underwood, 1959), В пробирки вносят по 100000 клеток в 1 мл среды 199, содержащей 20% телячьей сыворотки. После инкубирования в течение одних суток при 37°, не дожидаясь формирования сплошного слоя и не производя смены питательной среды, культуру используют для титрования вируса. Приготовляют последовательные разведения вируса кори с интервалом в 0,5 логарифма. ;По 0,5 мл каждого разведения вносят в три пробирки с культурами клеток HeLa. Через 3—4 дня зараженные пробирки просматривают под микроскопом. К этому времени в пробирках, в которые были внесены большие дозы вируса, обнаруживается типичное цитопатогенное действие вируса. Такие пробирки учитывают как положительные и исключают из опыта. Среду в пробирках сменяют дважды в течение всего наблюдения. После удаления питательной среды в пробирки наливают по 1,5 мл среды. После окончательного учета результатов опыта на 15-й день титр вируса вычисляют по методу Рида и Менча.
Трансмиссивные вирусы
В последние годы накоплено много фактов, свидетельствующих, что трансмиссивные вирусы хорошо размножаются в куль* туре ткани.
Определенное представление о культуральных свойствах наиболее известных вирусов дает табл. 16, заимствованная из работы Бакли (1959), которая изучала чувствительность 5 видов ткани
»- 01 Tnanrium'fMRHfiMV BHDVCV-
Чувствительность различных тканей к трансмиссивным вирусам
ш 2 Вирус Культура ткани
ФКЭ 1 & 1 HeLa ---St КЭЧ Детройт-б
I
Р ЦПЭ р ЦПЭ р ЦПЭ Р ЦПЭ Р ЦПЭ
Chifcungunya 0 0 + 4-
Восточного лошадиного
энцефаломиелита + +
Мауаго Тг 4675 0 0 + +¦ "Г +
May?, го Тг 15537 + 0 + “t • + f-
А Лесов Семлики -г +
Sindbfs +
Западного лошадиного
энцефал омиелита + +
