Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
ными факторами, содержащимися в вирусном материале и имеющими белковую природу (Бойер, Лейгенберг, Гинсберг, 1957; Роу, Хатли, Ройзман, Леви, 1958). Для дегенерации, вызванной этим фактором, характерно то, что после его удаления жизнеспособность клеток и их способность к размножению восстанавливается; 2) «позднее» цитопатогенное действие, в основе которого лежит размножение вируса. Дегенерация этого типа характеризуется необратимостью и прогрессирующим течением, приводящим к пол-ной деструкции клеточного слоя.
При инокуляции аденовирусов в культуры клеток HeLa, высокочувствительных к этой группе возбудителей и наиболее часто применяемых для их исследования, ранние дегенеративные изменения второго типа можно наблюдать уже через 24 часа, а спустя 48 часов наступает полная деструкция клеток [Хиллеман, Вернер (Hilleman, Werner, 1954)]. Связи между пораженными клетками нарушаются, округлившиеся клетки образуют гроздевидные скопления. В дальнейшем размеры клеточных скоплений постепенно увеличиваются, сами клетки уменьшаются. Поверхность клеток может иметь неправильную форму вследствие образования шаровидных или удлиненных выпячиваний.
На окрашенных гематоксилин-эозином препаратах обращают на себя внимание резкие изменения клеток, характеризующиеся интенсивным базофильным окрашиванием ядра и цитоплазмы, краевым смещением хроматина в ядрах, пикнозом, образованием внутриядерных включений.
Характерной особенностью аденовирусов является их широкий клеточный спектр. К этим вирусам чувствительны не только первичные и перевиваемые культуры многих видов клеток человека и обезьян, но также и ряд клеток, выращенных из тканей животных не приматов. Для титрования аденовирусов на различных видах клеточных культур характерен описанный выше тип цитопатоген-ного действия. Наблюдаются лишь различия во времени появления дегенеративных изменений клеток в зависимости от дозы инокулированного вируса, однако линейная логарифмическая зависимость между концентрацией вируса и временем появления цитопатогенного действия в общем сохраняется. Эту особенность иногда используют для быстрого и точного определения количественного содержания вируса, но самые параметры указанных взаимоотношений меняются в зависимости от типа вируса и вида тканевой системы. Необходимо, однако, отметить, что линейная зависимость между дозой вируса и временем появления цитонато-генных изменений нарушается, если культуры инокулируют нераз-веденной вирусной жидкостью. В этом случае развивается «раннее» цитопатогенное действие, вызываемое описанным выше фактором белковой природы, но не самой вирусной частицей.
Обычно для титрования аденовирусов прибегают к общепринятому методу, основанному на определении конечного пункта 50% инфекциозности. Титры вируса зависят от характера тканевой
системы, культуральной среды и времени инкубирования культур [Пирейра (Pereira, 1959)].
Последний фактор оказывает особенно большое влияние на результаты титрования аденовирусов. Максимальные титры вируса выявляются только после 20—28-дневной инкубации или даже после слепых пассажей жидкости из взятых в опыт культур [Грейстон, Лузли и др. (Graycton, Loosly et al„ 1959)].
Выбор клеточных культур для титрования аденовирусов може! облегчить табл. 15, заимствованная из работы Кэрсона (Carson
1958).
Таблица К
Чувствительность некоторых культур клеток к аденовирусам
Вид клеток
Тип «5 * >, ПОЧКИ почки мор ПОЧКИ плодя почки К All- 1 В-
адено -J - i с ~ кролика ской свинки коровы человека си ё Mis S X 41
вируса CJ |Sg.s- 4=1 ™ 0 К г- К ю г ч -г
X .ч tr D ? ? " 1 » S К * 5
" gs?5, s ® w ео о л г
Kgsgffl к •>* >> О 52 щ «а
а* _ <л
о Е <l>
е к &
1 1,85 1,75 1,15 1,75 1,65 1,55 1,75 0,95 1,25
2 1,65 1,25 1,05 1,75 1,25 0,75 1,55 1,25 0,65
3 1,75 2Д5 0,75 н/и н/и 1,75 1,25 1,75 1.65
4 0,75 1,05 0,65 0,85 н/и 0,75 н/и н/и н/и
5 1,75 1,85 0,55 1,45 1,65 1,25 1,75 0,45 1.3
6 1,75 1,75 0,45 1,85 1,65 1,45 1,75 1,95 1,75
7 1,25 1,45 н/и н/и я.'и 1,45 1,3 0,75 1,25
Обозначения: титры выражены в lg ТЦД50; н/и — не исследовали.