Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 64

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 101 >> Следующая

Специфичность вируса подтверждалась его нейтрализацией специфическими иммунными сыворотками.
Титр вируса в питательной среде колеблется от 101,7 до 100,6: титр вируса в клетках всегда был ниже соответствующего титра в питательной среде и колебался от неразведенного до 103,2. По
расчетным данным, 1 LDso вируса определялась в 3—400 клетках латентно инфицированной культуры.
Удаление из питательной среды сыворотки вело к исчезновению инфекционного вируса как из среды, так и из клеток.
Перед удалением сыворотки из среды вирус обнаруживался в клетках и в жидкой фазе. После замены среды на бессыворо-точную вирус обнаружить не удалось.
В контрольных культурах, растущих в среде с сывороткой, вирус продолжал размножаться. Однако средние величины ядер в инфицированных клетках в бессывороточной среде оставались больше контрольных как через 4, так и через 9 дней культивирования, что может указывать на переход вируса в эклиптическую фазу.
Латентная инфекция клеток Нер-2 вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита не изменила их чувствительности к вирусу полиомиелита, осповакцины и гриппа. Была отмечена интерференция вируса клещевого весенне-летнего энцефалита в латентно инфицированных клетках Нер-2 с вирусом западного лошадиного энцефаломиелита.
Таковы основные сведения, полученные при изучении латентных форм вирусной инфекции в культуре тканей.
ТИТРОВАНИЕ ВИРУСОВ И АНТИТЕЛ В КУЛЬТУРЕ ТКАНИ 4 ПО ЦИТОПАТОГЕННОМУ ДЕЙСТВИЮ
КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПЛАЗМИРОВАННЫХ
КУЛЬТУРАХ
Впервые способность вирусов вызывать поражение клеток, растущих in vitro, была описана в 1943 г. Хуангом. При Заражении вирусами западного лошадиного энцефаломиелита культур кожно-мышечной ткани куриного эмбриона он наблюдал гибель клеток. Значение этого феномена в полной мере было оценено лишь после исследований Роббинса, Эндерса и Уеллера (Robbins, Еп-ders, Weller, 1950). Они показали, что вирусы полиомиелита типа I, II, III вызывают интенсивную дегенерацию клеток различных тканей обезьяны и эмбриона человека. Авторы работали с кусочками тканей, фиксированных в слой свернутой плазмы. Для ускорения роста клеток и более длительного сохранения их жизнеспособности пробирки с культурами помещали в специальный барабан, вращающийся со скоростью Ш—12 об/час. Заражение культур производили после того, как вокруг кусочков ткани образовывался достаточно большой венчик (диаметром до ( см) молодых клеток. После смены среды в пробирки вносили по 0,1 мл вируссодержащей суспензии. Культуры наблюдали в течение
заражении культур минимальными дозами вируса отмечали через 14 дней.
Различные авторы доказали возможность титрования и типн-рования вирусов полиомиелита в плазмированных культурах кусочков семенников и почек обезьяны, крайней плоти, почек и матки, а также миндалин взрослых людей. М. К. Ворошилова, М. П. Чумаков, В. И. Жевандрова и Е. С. Залманзон (1956) на культурах тканей эмбриона человека выделили из разных материалов, взятых от больных или контактировавших с ними лиц, а также образцов центральной нервной системы умерших от полно миелита 192 штамма. Из них 175 были идентифицированы как вирус полиомиелита типа I и 3 штамма — как вирус типа II. Остальные штаммы идентифицировать не удалось.
Дальнейшее развитие метода привело к его значительному упрощению. Ли и Шеффер (Li, Schaeffer, 1953); Мельник и Риор-дан (Melnick, Riordan, 1952) нашли, что можно отказаться от использования вращающегося барабана при выделении и культивировании вирусов. Не повлияло на точность результатов применение так называемых стационарных пробирок с тканевыми культурами и для титрования вирусов. В таких пробирках кусочки ткани фиксируют в свернутой плазме на одной стороне пробирки у ее основания. Пробирки помещают в термостат в наклонном положении под углом 5° к горизонтальной поверхности, благодаря чему кусочки оказываются под слоем питательной среды.
В настоящее время использование плазмированных культур для изучения большинства вирусов оставлено в связи с внедрением в практику однослойных культур. Тем не менее этот метод еще не утратил своего значения для культивирования и титрования некоторых вирусов. Г. Д. Засухиной и Е. Н. Левкович в 1957 г. было обнаружено цитопатогенное действие вируса весенне-летнего клещевого энцефалита (штамма «Фатеев» и «Софьин») на фиб-робласты человека. Для приготовления культур использовали кусочки кожно-мышечной ткани 8—12-недельных эмбрионов человека. Клетки выращивали в среде 27. Культуры заражали на 2-е сутки. В качестве инфекционного материала использовали 10% суспензию мозга белых мышей, зараженных вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита, или культуральную жидкость предыдущего пассажа. После 15-минутного контакта ткани с 0,2 мл инфекционного материала в пробирки вносили по 1,3 мл питательной смеси, состоящей из 70% коровьей амниотической жидкости, 10% инактивированной лошадиной сыворотки и 20% раствора Хэнкса. В некоторых опытах использовали среду 199 с 2% лошадиной сыворотки.
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed