Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Это заключение авторов следует признать ошибочным. Об этом свидетельствуют результаты, полученные в исследованиях Фогт т Делбекко (1958) и О. Г. Анджапаридзе (1961).
Фогт и Делбекко пассировали клетки HeLa, зараженные ви русом полиомиелита, в среде, содержащей антитела (титр 1:50) С каждым пассажем в клетках отмечалось убывающее количестве вируса. На 6-м пассаже вирус в клетках не обнаруживался. Даль нейшее культивирование этих клеток в среде без антител не при водило к их дегенерации. Таким образом, по мнению авторов культура была «излечена» от временной вирогенности.
О. Г. Анджапаридзе провел специальную серию опытов дл> изучения действия антител на распространение инфекции вирусом полиомиелита в перевиваемых клетках Нер-2. Культура кле ток Нер-2 инфицировалась 1000 ТЦД50 вируса полиомиелита I типа штамма Брунгильда. Через 30 минут экспозиции при 37° неад сорбированный вирус отмывали, культуры заливали питательно! средой. Контрольные культуры не содержали антител, а в опытны*
Действие антител на развитие вирусной инфекции в культуре клеток Нер-2
¦разведение Критерии оценки Пассаж
0 1 >1 ш IV V VI VII VH1
Контроль ТЦД50 на одну клетку ....
в 1 мл среды..... W
Дегенерация клеток . ....... + -!-+• +
1 :128, а ТЦДю на одну клетку .... 0,6 0,08 0,06 0,0009 0,006 0,003 0 0 0
в 1 мл среды..... и/и 104 103’5 0 0 0 0 0 О
Дегенерация клеток ........ --- + + + +
1:1024 ¦ ТЦД* на одну клетку .... 0,04 0,03 0,004 0,0006 0,00004 0 0 0 0
в 1 мл среды . . Ь3 ю4 10й ,0М 0 0 0 0 0
Дегенерация клеток ........ --- “Г Т- i --- - --- --- ---
1 :1024 ТЦДм , на одну клетку .... 0,04 0 0 0 0 0 0 0 0
10к 0 0 0 0 0 0 0 0
Дегенерация клеток . . ..... - --- --- --- - --- --- ---
Обозначения, Дегенерация клеток выражена по 4-крестовой системе; н/и — не исследовано; 0 — отсутствие вируса
добавляли антитела соответственно в титрах 1:128—1:256 и 1 : 1024. Проводили наблюдение за морфологией культур, периодически брали пробы для титрования. Культуры, в которых клетки не дегенерировали, периодически пассировались. Результаты этих исследований представлены в табл. 12.
Были получены четкие данные, свидетельствующие, что антитела препятствуют распространению инфекции в зараженной культуре клеток и тем интенсивнее, чем выше концентрация антител в питательной среде. «Излеченные» культуры клеток наблюдались длительное время, и вирус полиомиелита в них не был обнаружен.
Как уже упоминалось ранее при определенных условиях вирусная инфекция культур клеток может протекать в латентной форме, без внешних проявлений, т. е. без видимого цитопатогенно-го эффекта.
Изучение этой формы инфекции в клетках, культивируемых вне организма, важно как для выяснения некоторых закономерностей латентной инфекции целостного организма, так и для практики культивирования вирусов.
Ниже мы рассмотрим условия, при которых в культуре клеток может быть получена латентная инфекция, вызванная цитопато-генными вирусами. Такая форма инфекции наблюдается при наличии в культурах специфических вируснейтрализующих антител или ингибиторов вируса, факторов, поддерживающих на оптимальном уровне клеточный метаболизм, а также при недостаточном питании клеток.
Аккерманн и Куртц (1955) наблюдали линию клеток HeLa, случайно инфицированную вирусом полиомиелита III типа. Эту линию клеток культивировали во многих пассажах в среде, содержащей сыворотку человека. Как оказалось, в этой сыворотке содержались специфические вируснейтрализующие антитела. Исключение этой сыворотки из состава питательной среды приводило к специфической дегенерации клеток и обнаружению высоких концентраций вируса.
Аналогичные результаты могли быть получены при заражении клеток HeLa большими дозами вируса полиомиелита. Для этого после экспозиции в течение 1 часа неадсорбированный вирус удаляли отмыванием и к культурам добавляли среду, содержащую антитела. Большинство клеток в культурах разрушалось вследствие развития вирусной инфекции, однако некоторое количество зараженных клеток выживало; их культивировали в серийных пассажах, если в питательной среде присутствовали полиомиелитные антитела. Таким образом, наблюдалось размножение клеток HeL.'i, инфицированных вирусом полиомиелита. Вирус также размножался, но на низких уровнях. Удаление антител из среды приводило к развитию обычного цитопатогенного эффекта. Клетки этих культур отличались от первоначальной популяции некоторыми особенностями: они были продолговатыми, поглощали меньше кислорода, обладали некоторой резистентностью к реинфекции другими
