Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Однако, помимо перечисленных выше достоинств, перевиваемым клеткам присущи и некоторые недостатки, несколько ограни--чввающие возможность их использования. Явления «старения» неспецифической дегенерации культур, выражающиеся в измене нии морфологии клеток и снижении чувствительности к вирусам у перевиваемых клеток происходят, как 'правило, быстрее, чем j клеток первичных культур. Поэтому для длительных опытов обычно используют первичные клеточные культуры. Известно, что ряд] перевиваемых линий клеток (HeLa, FL и другие) высокочувствителен к вирусам полиомиелита. Тем не менее при контроле инактивированных полиомиелитньгх вакцин на возможное присутствие минимальных количеств не дообезвреженного формальдегидом . вируса используют исключительно первичные трипсинизированньк культуры почечного эпителия обезьян, что связано с необходимостью длительного (до 4 недель) выдерживания в термостате матрасов с клетками, инокулированными деформалинизирован-ной вакциной.
В процессе многократных перевивок существует опасность загрязнения культур бактериями и грибками, что может привести к утрате клеточного штамма [Хёрн, Оффисе, Эльснер, Броуи (Hearn, Officer, Eisner, Brown, 1959)]. Поэтому при работе t перевиваемыми клетками необходимо строго контролировать стерильность всех используемых культуральных сред и растворов i тщательно соблюдать правила асептики. Кроме того, рекоменду ется на случай возможного бактериального загрязнения иметь н запасе резервные культуры, сохраняемые либо в термостате, либс при комнатной температуре. Поскольку клеточные взвеси в тече ние длительного времени сохраняют свою жизнеспособность пр» хранении в холодильнике (при 3—4°), этот способ может приме няться для создания дополнительного запаса клеток. О хранениг клеток ниже будет сказано особо.
Динамика размножения перевиваемых клеток принципиальнс сходна с процессом размножения бактерий и включает те же ста
дни: латентную (лаг-фаза), стадию логарифмического роста,стационарную и стадию логарифмического отмирания. Форма и ха* рактёр кривой размножения зависят как от генетических особенностей данного клеточного штамма, так и от используемой культуральной среды. У
Помимо указанного сходства процессов размножения, клетки перевиваемых линий имеют еще некоторые общие черты с бактериями и одноклеточными организмами, что дает основание говорить о наступлении «микробиологической эры» в области культуры тканей [Суим, 1957; Моргай (Morgan, 1958)].
Основными чертами сходства являются следующие:
а) приготовление однослойных культур и получение из них негативных колоний вирусов (бляшек), что вполне аналогично взаимоотношениям в системе 'бактериальная клетка — бактериофаг;
б) возможность выделения чистых, так называемых клональных, линий, происходящих из отдельных изолированных клеток;
в) требования клеток к условиям питания (составу питательной среды) очень сходны с требованиями бактериальных клеток. Изучение потребностей клеток млекопитающих в питательных веществах производится методами, аналогичными принятым в бактериологии (Морган, 1958);
г) клеткам перевиваемых линий, как и бактериям, присуща изменчивость, которая может приводить к изменению ряда свойств клеточной популяции (динамики размножения, морфологии, чувствительности к вирусам и т. д.).
Выше указывалось, что определение «стабильные» применительно к перевиваемым клеткам крайне условно. Как состав, так и свойства клеточной популяции в процессе пассажей могут претерпевать существенные изменения. Одной из причин этого может быть разнородность клеточных элементов, образующих популяцию. Она может быть результатом того, что сама исходная ткань, послужившая источником получения клеточного штамма, состояла из неоднородных в морфологическом и физиологическом отношениях клеток. Изменение условий культивирования {состава среды, количества засеваемых клеток, интервалов между 'перевивками .и т. д.) может оказаться более благоприятным для одной из клеточных групп, которая вскоре начинает преобладать и уже определяет новый характер клеточной популяции в целом. Ярким примером, иллюстрирующим такого рода изменения клеточных штаммов, служит проведенное Сивертоном сравнительное изучение нескольких подштаммов клеток HeLa, полученных из разных лабораторий, где они поддерживались в течение длительного времени. При сравнении с основным штаммом HeLa, поддерживав-мым в лаборатории автора, два подштамма обнаружили, существенные отличия в морфологии клеток, их устойчивости при хранении в замороженном состоянии, адгезивной способности (прочность прикрепления к стеклу), а также чувствительности к вирусам полиомиелита (Шерер, 1955).
Дарнелл и Сойер (Darnell, Sawyer, 1959) провели сравнительное изучение чувствительности к вирусу полиомиелита обычной лабораторной линии клеток HeLa и нескольких клональных штаммов, полученных из отдельных клеток этой же линии. Было найдено, что титры бляшкообразующих единиц вируса полиомиелита, установленные на однослойных культурах одного из клональных штаммов, во много тысяч раз ниже, чем титры, отмеченные при использовании обычной линии HeLa. Таким образом, показано, что родительская популяция клеток HeLa содержит клетки, относительно резистентные к вирусу полиомиелита.
