Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 28

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 101 >> Следующая

В начале производства инактивированной полиомиелитной вакцины Солка накопление вирусного материала проводили именно
в переживающих культурах почечной ткани обезьяны [Фарелл, Вуд и др. (Farell, Wood et al., 1953)].
Все три антигенных типа вируса полиомиелита культивировали в матрасах Повитской, содержащих 500 мл среды 199 и 5 г измельченной почечной ткани. Культуры в матрасах помещали на качающиеся стеллажи при 37°. Высокие титры вируса в жидкой среде были между 2-м и 7-м днем после заражения.
КУЛЬТУРЫ ФИКСИРОВАННЫХ КУСОЧКОВ ТКАНИ
Метод переживающих тканей для культивирования вирусов в настоящее .время практически не применяется.
Ограниченное применение имеет и метод, рассматриваемый ниже. В основу приготовления культур фиксированных кусочков положен метод Карреля-Берроуза (1910)—культивирование кусочков ткани, фиксированных в сгустке плазмы. Применяя этот метод, можно выращивать клетки любых тканей.
Так как методически приготовление культур фиксированных кусочков практически не зависит от вида используемой ткани, мы приведем способ приготовления культур из эмбриональных тканей человека.
Сбор материала и предварительная обработка ткани изложены выше.
Измельченную ткань несколько раз отмывают в солевом растворе от тканевой жидкости и форменных элементов крови. Проверяют на стерильность посевом на бульон.
Измельченную ткань в питательной среде при 4° можно хранить до 6—7 дней. Однако следует учесть, что по мере хранения ростовая активность клеток снижается.
Для приготовления культур фиксированных кусочков ткани обычно используют куриную плазму. Плазму других видов животных применяют редко.
Пробирочные культуры готовят следующим образом.
В стерильные пробирки по 1—2 капли вносят куриную плазму. Пастеровской пипеткой распределяют ее равномерным слоем по всей внутренней поверхности нижней трети (для вращающихся культур) или по одной стороне пробирки (для стационарных культур). В каждую пробирку пипеткой вносят по 5—10 кусочков ткани, которые распределяют друг от друга на расстоянии примерно 0,5—1 см. Затем в пробирки для свертывания плазмы прибавляют по 1—2 капле куриного эмбрионального экстракта.
Для равномерного распределения плазмы и ее свертывания пробирки вращают или оставляют в горизонтальном положении на 1—2 минуты до наступления полной коагуляции. После свертывания плазмы в пробирки добавляют по 1—2 мл питательной среды, закрывают резиновыми пробками и помещают в термостат при 36—37°. В зависимости от того, в каком положении на-
ходятся пробирки при культивировании ткани, различают стационарные и вращающиеся культуры. В последнем случае пробирки с культурами помещают в специальные барабаны, вращающиеся со скоростью 10—12 об/час. Вращающиеся барабаны устанавливают в термостатной комнате или в термостате.
На рис. 4 изображен вращающийся барабан, 'Выпускаемый заводом «Технолог» (Л. Н. Христов, Г. С. Безверхий, Н. Е. Шу-ляпин, 1956), и пробирки в штативах для стационарного культивирования.
Рис. 4. Вращающийся барабан для культивирования клеток и штатив для выращивания клеток в стационарном положении.
Ось вращающихся барабанов установлена под углом в 5°. При стационарном культивировании пробирки нужно содержать в штативах также под углом в 5°. Опыт культивирования тканей в стационарных условиях и при вращении пробирок не подтвердил сложившегося первоначально мнения об особых преимуществах и большей чувствительности к вирусам культур во вращающихся пробирках.
При выращивании культур питательную среду меняют каждые 2—3 дня. Через 24 часа культивирования можно наблюдать около кусочков ткани первые выросты, состоящие из прозрачных, тонких клеток. К 6-му дню все эксплантированные кусочки окружены более или менее широким поясом выросших клеток. Одновременно с пышным разрастанием молодых клеток на 4—5-й день вокруг кусочков ткани образуются участки просветления от растворения растущими клетками сгустка плазмы. Этот так называемый лизис плазмы является небольшим осложнением при культивировании по этому методу. Особенно большой лизис плазмы отмечают обычно в культурах с растущими эпителиальными клетками. Вследствие разжижения сгустка плазмы культуры мо-
гут погибнуть из-за отторжения кусочков ткани от стенок пробирки. Поэтому профилактически на 4—5-й день, до появления лизиса, производят так называемую подкормку культур, т. е. дополнительное наслаивание плазмы с целью обновления сгустка.
Культуры кусочков тканей могут быть приготовлены и в чашках Карреля, плоскодонных колбах, матрасах и других сосудах. Для фиксации кусочков тканей, кроме фиксации в сгустке плазмы, были предложены и другие приемы: например, фиксация в перфорированном целлофане. Однако может быть применен бо-
Рис. о. Культура эмбриональной ткани человека, фиксированной в плазме. X 70.
лее простой прием, при котором пробирки или другие сосуды для культивирования предварительно подогревают до 45°, затем в них вносят кусочки ткани и распределяют их по стеклу. После этого дается экспозиция в несколько минут. Кусочки прилипают к стеклу, после чего в сосуды вносят питательную среду [Моран, Мельник (Moran, Melnick, 1953)].
Предыдущая << 1 .. 22 23 24 25 26 27 < 28 > 29 30 31 32 33 34 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed