Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 25

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 101 >> Следующая

22. Среда Лаврова, Кукайн, Фелдмана (1959). Для культивирования ткани используются белковые гидролизаты аминопеп-тида-2 и аминокровина.
23. Среда Лаврова (1960) для выращивания клеток. В состав среды входят аминопептид-2, нуклеиновокислый натрий, 7 витаминов группы В и раствор Хэнкса.
Холин . ...............................0,01 мг
Ниацин ..................................... 1 »
Пиридоксин ................................. ! »
Рибофлавин ................................. 0 Л »
Пантотенаг кальция...................... . 1 »
Тиамин ................................ . . 1 »
Фолиевая кислота ........................... 0,01
Нуклеиновокислый натрий . . ....... . . '20 »
Аминопептид-2 ............. . 5—7%
Бычья сыворотка ...............................10%
(на 1 л раствора Хэнкса)
Приготовление среды. Раствор 1. В 50 мл тридистиллированной воды, подкисленной 0,5 мл 80% уксусной кислотой, растворяют 2,5 мг рибофлавина (для полного растворения воду с внесенным препаратом подогревают на кипящей водяной бане в течение 40—50 минут). После растворения рибофлавина вносят следующие ингредиенты: 25 мг никотиновой кислоты, 25 мг пири-доксина, 25 мг пантотената кальция, 25 мг тиамина.
Раствор 2. 5 мг гидрохлорида холина растворяют в 100 мл тридистиллированной воды.
Раствор 3. 5 мг фолиевой кислоты растворяют в 400 мл тридистиллированной воды (pH 7—7,2).
Раствор 4. 200 мг нуклеиновокислого натрия растворяют в 100 мл тридистиллированной воды.
Растворы 1, 2 и 4 стерилизуют автоклавированием при 1 атм. в течение 10 минут.
Раствор 3 дробно стерилизуют в аппарате Коха. После стерилизации растворы 2 и 3 сливают вместе. Все растворы хранят при комнатной температуре 1в темном месте. Раствор 1 годен к употреблению в течение 7 дней. Растворы 2, 3 и 4 хранят 3—
4 недели.
Питательную среду готовят непосредственно перед употреблением: 2 мл раствора 1, 1 мл смеси растворов 2, 3, 10 мл раствора 4, 50—70 мл аминопептида-2, 100 мл бычьей сыворотки.
После этого добавляют раствор Хэнкса до 1000 мл и антибиотики при концентрации клеток 2,5 • 10Е—3,5 ¦ 105 в 1 мл среды. Образование сплошного слоя наблюдается на 3—4-й день. Без смены питательной среды ,клетки переживают до 21-го дня.
24. Среда со снятым молоком [Барон, Лон (Baron, Lon, 1958)]. Среду готовят на среде 199 или среде Игла с различными концентрациями снятого молока (от 10 до 40% конечной концентрации) .
Эта среда применима как стандартная для сравнительных опытов с различными вирусами на разных клеточных культурах; для испытания безопасности вирусных вакцин, выделения вирусов, которые не культивировались ранее из-за нейтрализации
их средой, содержащей сыворотку. Среда проста по изготовлению. Авторами эта среда была использована для культивирования (подкармливания) клеток HeLa.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД И РАСТВОРОВ
Внешним вид. По внешнему виду все растворы и питательные среды для культивирования ткани должны быть прозрачными. Среды, содержащие индикатор феноловый красный, имеют крас-но-оранжевый цвет.
Концентрация водородных ионов. pH питательных сред и растворов должен быть равен 7,0—7,2. Определение pH производят с 'Помощью потенциометра или шкалы буферных растворов с индикатором феноловым красным.
Стерильность. Готовые питательные среды и растворы для проверки на стерильность выдерживают в течение 4 суток при 37°. При этом среды должны оставаться прозрачными ‘и величина pH не должна смещаться более чем на 0,1. Стерильность растворов и питательных сред рекомендуется также контролировать путем посева на следующие среды: сахарный бульон, среду (агар) Са-буро, бульон Готтингера и мясо-пептонный агар. Посевы выдерживают в течение 8 суток при 37°; за исключением посева на среду Сабуро, последнюю выдерживают при комнатной температуре (20—22°) в течение 15 дней.
Питательные свойства. Питательные свойства каждой серии среды рекомендуется исследовать на тканевых тест-культурах. В качестве тканевых тест-культур рекомендуются клетки перевиваемых штаммов СОЦ или Нер-2.
На испытуемой среде, содержащей 10% телячьей сыворотки, готовят по обычной методике взвесь клеток и засевают 2—3 матраса.
На 7-й день культивирования без смены среды выросший слой клеток снимают раствором версена и в полученной суспензии подсчитывают число выросших клеток. Количество клеток в пригодной для культивирования среде должно увеличиться по сравнению с засеянным не менее чем в 5 раз.
В случае недостаточного роста необходимо провести повторные испытания среды. При повторении отрицательных результатов среду бракуют.
Определение активности трипсина
Определение активности трипсина производят на другой день после фильтрации. Для этого используют метод Шоу и Петико-лара (Show, Peticoiar, 1948) с применением казеина в качестве субстрата. Объем пробы — 30—40 мл.
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed