Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
L-Глутамин (естественный) ........................100 »
Витамины
Тиамин ....................................... 0,01 мг
Рибофлавин ............... ... 0.01 »,
ГГиридоксин ............................ ... 0,025 »
Пиридоксаль ...................................... 0,025 »
Никотиновая кислота .............................. 0,025 »
Пантотенат кальция..................................
Биотин
Фолиевая кислота ...................................
Гидрохлорид холина .................................
i-Инозит ...........................................
«-Аминобензойная кислота............................
Витамин А (кристаллический).........................
Кальциферол (витамин D).............................
Менадион (витамин К) ....................'..........
Двунатриевый фосфат ct-токоферолэ (витамин Е) ,
Аскорбиновая кислота (витамин С) ...................
Глутатион . . ... .........................
0,01 мг
0,01 *
0,01 »
0,5 »
0,05 >
0,05 »
0,1 »
0,1 »
0,01 »
0,01 »
0,05 »
0,05 »
20 »
0,2 »
50 »
0,1 »
Твин-80 ...............
Холестерин .... Ацетат натрия . . Железо азотнокислое
1 (на 1 л бидистиллированной воды)
Среду 635 стерилизуют фильтрованием через асбестовые прокладки, хранят при температуре 4—6° в течение 3 месяцев.
5. Среда 703 (Хели, Фишер и Паркер). В среде увеличено содержание цистеина, исключены пуриновые и пиримидиновые основания и введены некоторые ферменты, стимулирующие тканевой обмен.
Усовершенствование синтетических питательных сред развивалось главным образом в сторону упрощения среды 199 и определения минимального количества компонентов, необходимых для культивирования клеток и вируса.
Так, Игл (Eagle, 1957, 1958) установил, что в число необходимых компонентов для роста клеток животных и человека должны входить по меньшей мере 13 аминокислот (изолейцин, лейцин, лизин, метионин, фенилаланин, триптофан, треонин, валин,-цнстин, тирозин, аргинин, гистидин, глутамин в виде L-форм); 8 витаминов (холин, фолиевая кислота, никотинамид, пантотенат, пири-доксаль, тиамин, рибофлавин, L-мезоинозит), глюкоза; 6 неорганических ионов (калий, натрий, магний, кальций, хлориды, фосфаты) .
Присутствие аминокислот в среде обязательно. Игл указывает, что, если из среды, которая содержит только основные вещества, необходимые для роста, удалить одну важную аминокислоту, клетки в течение нескольких дней погибнут. На ранних стадиях дегенеративные изменения обратимы. Если недостающую аминокислоту вновь добавить в среду, клетки «выздоравливают» и продолжают размножаться.
Однако Игл отмечает, что у разных клеточных штаммов имеются небольшие различия в потребности аминокислот; Так, клетки крысиной карциномы [Маккой, Максуэл, Ньюмен (McCoy, Maxwell, Neuman, 1956)] требуют в дополнение ж глутамину аспарагин. Кроличьим фибробластам необходим серии [Хэф, Суим (Haff, Swim, 1956)].
Клетки почки обезьян на (первом пассаже в культуре ткани используют глутаминовую .кислоту вместо глутамина, очевидно.
вследствие присутствия активного синтезированного глутамина. Глицин оказывал сильно стимулирующее действие на рост эпителия обезьяньей почки.
Глутамин заслуживает внимания ввиду его особого 'Положения в синтезе вируса. Он, как и всякая другая аминокислота, переходит в -белок [Левинтоф, Игл, Пайз (Levintow, Eagle, Piez,
1957)].
Для роста клеточных ‘культур, -помимо упомянутых аминокислот, необходимы 8 витаминов. Семь витаминов комплекса витамина В (холин, фолиевая кислота, никотинамид, пантотенат, пи-ридоксаль. тиамин, рибофлавин) и мезоинозит. При исключении одного витамина из состава питательной среды может наступить дегенерация клеток.
Игл на основании изучения питания клеток пришел к заключению, что для выживания и роста большинства клеток млекопитающих в .культуре необходимы 28 питательных факторов: 13 аминокислот, 8 витаминов, глюкоза и 6 ионов (натрий, калий, кальций, магний, фосфаты, хлориды).
В дополнение к среде, указывает Игл, необходимо добавлять небольшое количество белка сыворотки. Потребности в питании клеток для синтеза вируса разработаны Иглом для клеток HeLa с вирусом полиомиелита. В этой системе для вирусного синтеза требуются глюкоза и глутамин [Игл, Хабел (Eagle, Habel, 1956)]. В среде без глутамина и глюкозы, но содержащей все остальные основные аминокислоты, витамины, соли количество вируса, вырабатываемого клетками HeLa, было в 1000 раз меньше, чем в полной среде.
6. Среда Игла для клеток L и других клеточных линий
(Игл, 1955).
L-Аргинин .........................................17,4 мг
L-Цистин .......................................... 4,8 »
L-Гистидин ........................................ 3,1 »
L-Изолейцин ....................................... 26,2 »
